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基于过硬的引物合成及标记技能,多重 PCR扩增技能,测序技能,本公司推出SNP分型服務,分型要领包罗:直接测序法、连接酶检测反响(LDR)分型要领、多重SNaPshot SNP分型要领、MassArray分型要领以及Taqman探针法,为宽大客户提供多样的选择!
1. 连接酶检测反响(LDR)分型要领
技能原理:主要应用连接酶检测反响 (ligase detection reaction,LDR)技能。即在Taq DNA连接酶的作用下,当左右两条寡核苷酸探针与目的DNA序列完全互补,并且两条探针之间没有空隙时才华产生连接反响,不然连接反响不能进行,最后通过荧光扫描片段长度,实现对SNP 位点的检测。
原理及實驗流程示意圖:
2. 多重SNaPshot SNP分型要领
技能原理:SNaPshot SNP分型是一种以单碱基延伸原理为底子,同时利用多重PCR对多个已知SNP 位点进行遗传分型的要领。在一个含有测序酶,四种荧光标记的ddNTP,紧挨多态位点5’端的差别长度延伸引物和PCR产物模板的反响体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI 3730 测序仪跑胶后,凭据峰的颜色可知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型,凭据峰移动的胶位置确定该延伸产物对应的SNP位點。
3. MassArray SNP分型要领
技能原理: Sequenom MassArray系统主要是利用基质帮助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF MS) 进行阐发,即PCR扩增产物大概预处理惩罚样本在延伸单碱基后,将制备的样品阐发物与芯片基质共结晶,将该晶体放入质谱仪的真空管,尔后用瞬时纳秒 (10-9s) 强激光引发,由于基质分子经辐射吸收能量,导致能量蓄积并迅速产热,从而使基质晶体升华,核酸分子就会解吸附并转变为亚稳态离子,产生的离子多为单电荷离子,这些单电荷离子在加快电场中得到相同的动能,进而在一非电场漂移区内凭据其质荷比率得以疏散,在真空小管中飞行到达检测器。
4.直接測序法
技術原理:將待檢測片段進行PCR擴增並直接測序是SNP檢測要领中最准確的要领。純合位點爲單峰,而雜合峰爲套峰,因而很容易將幾種基因型區分開來。直接測序法不僅可用于對已知位點的檢測,還可用于發現未知的SNP位點。
實驗結果圖:
5.Taqman 探針要领
技術原理:在PCR 反應系統中参加2 種差别熒光標記的探針,它們可分別與2個等位基因完全配對。正常情況下,由于探針5′端熒光基團和3′端淬滅基團緊鄰在一起,熒光被淬滅。隨著PCR 的有效進行,與模板完全配對的探針逐步被Taq DNA 聚合酶5′→3′外切酶活性切割,致使探針5′端上的熒光基團與3′端的淬滅基團分離,淬滅效應解除,報告熒光基團被激活;而與模板不能完全配對的探針(代表另一種等位基因)不能被有效切割,故檢測不到熒光信號,通過相應儀器檢測熒光值的變化即可實現SNP位點檢測。
原理及流程示意圖: