細胞/組織基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）

GK4002-50

GK4002-100

一.  試劑盒組成

*Proteinase K使用前，每管参加1 ml 無菌水溶解，混勻，分裝後-20℃生存。

(a) ACL Solution低溫時可能出現結晶，請于37℃溫育溶解搖勻後使用，不會影響産率。

(b) 首次使用前，必須在AW1溶液瓶中按体现量参加無水乙醇，充实混勻後使用。每次使用後將瓶蓋蓋緊，以保持中的AW1乙醇含量。如果您發現AW1由于運輸或保管不當造成容量嚴重禁绝，請用量筒定容後再参加0.6倍體積的無水乙醇。

(c) 首次使用前，必須在AW2瓶中参加4倍體積的無水乙醇，充实混勻後使用。每次使用後將瓶蓋蓋緊，以保持AW2中的乙醇含量。如果您發現AW2由于運輸或保管不當造成容量嚴重禁绝，請用量筒定容後再参加4倍體積的無水乙醇。

(d) AE Buffer爲10 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA pH 8.5pH8.5。TE(pH 8.0)大概水（pH>7.0）均可以使用，但是DNA的洗脫效率通常要低20%左右。

二. 制品說明

GenClean柱的內裝有一層惰性大分子质料，它可以選擇性吸附核酸物質，但不吸附卵白質、多糖和其它非核酸類物質。通過ACL Solution 裂解釋放出基因組DNA，然後通過GenClean柱來吸附基因組DNA，經簡單的洗滌步驟撤除非特異性結合的雜質, 然後用AE Buffer、TE大概水洗脫。

三．主要用途

從各種動物組織、動物細胞壹s褒m齒類動物(如鼠等)尾巴等质料中小量提取基因組DNA。

四．主要特點

1. 適用範圍廣，適用于各種動物組織质料基因組DNA的抽提。

2. 無須酚和氯仿抽提，無須乙醇沈澱。

3. DNA純度好，得率高，無卵白質和RNA汙染。

五. 操纵步驟：

樣品預處理：

·動物組織：

1. 切取5～20mg的動物組織质料，在液氮中將組織研磨成粉末，並轉移至1.5ml的離心管中。

2. 然後参加400?l ACL Solution，如有凝結塊，可以用槍頭吹吸打坏。震蕩混勻1分鍾，参加20?l

Proteinase K然後置于55℃安排20分鍾～3小時，在此期間間或取出混勻，有助于充实裂解。裂解完全的樣品應澄清透明。差别來源的組織，完全裂解時間可能差異較大。

3. 取出樣品，待降至室溫時輕輕震蕩混勻。

·齧齒類動物(如鼠等)尾巴：

1. 從動物尾部末端切取0.5～1cm的組織质料，在液氮中將組織研磨成粉末，並轉移置1.5ml的離心管中。

2. 然後参加400?l ACL Solution，震蕩混勻1分鍾，参加20?l Proteinase K然後置于55℃水浴1～3小

時，在此期間可以適當取出混勻，有助于充实裂解。

3. 取出樣品，待降至室溫時輕輕震蕩混勻。

·培養成熟的動物細胞：

1. 在500～1000rpm下離心約3～5分鍾，收集细胞( 約5x10⁶ )。

2. 参加400?l ACL Solution震蕩混勻1分鍾，参加20?l Proteinase K,然後置于55℃水浴10～20分鍾，在此期间可以适当取出混匀，有助于充实裂解。

3. 取出樣品，待降至室溫時輕輕震蕩混勻。

DNA提取：

經過上面預處理的樣品凭据下面步驟提取基因組DNA。

4. 在經過預處理好的樣品中，依次参加100μl NAB溶液，用力搖勻，至于70℃ 10 min。

5. 冷卻到室溫，参加250μl物水乙醇，混勻，如果有沈澱出現出現，用藍槍頭吹打混勻，加到吸附柱上。

6. 8,000rpm離心1分鍾，取下GenClean Column，倒掉收集管中廢液。

7. 將GenClean Column放接纳集管中，参加500?l AW1 Solution，8,000rpm，室温離心1分鍾,倒掉廢液。

8. 將GenClean Column放接纳集管中，参加500?l AW2 Solution ，8,000rpm，室温離心1分鍾,倒掉廢液。

9. 重複步驟8一次。

10. 取下GenClean柱，弃去收集管中的废液。將柱放接纳集管中，12,000rpm，室温離心1分鍾，以撤除殘留AW2 Solution。

11. 將柱放入新的洁净1.5ml離心管中，在柱中央参加50～100 ?l AE Buffer，室溫或55℃安排２分鍾。然後12,000rpm，室温離心1分鍾。離心管中的液体即爲基因组DNA。根據用途，樣品可于4℃或-20℃生存。

注意：爲提高洗脱率，AE Buffer沒有须要加熱至65℃，高于27℃即可，反複提取可以提高洗脫率。

对付室温较低，離心柱需要在37℃預熱，徹底去除乙醇和柱子預熱。

      用分光光度計測量基因組DNA含量， OD_260nm值爲1相当于大約50 ?g/ml雙鏈DNA，並通過0.7%瓊脂糖電泳凝膠判定DNA樣品的完整性和是否有RNA。

六．儲存

常溫,一年

Product Use Limitation:

This product is developed, designed and sold exclusively for research purpose and in vitro use only.